KINDAI UNIVERSITY


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谷 哲弥タニ テツヤ

プロフィール

所属部署名農学部 バイオサイエンス学科 / 農学研究科
職名講師
学位博士(農学)
専門動物発生工学
ジャンル科学・技術/遺伝子・DNA技術
コメンテータガイドhttp://www.kindai.ac.jp/meikan/504-tani-tetsuya.html
ホームページURLhttp://nara-kindai.unv.jp/02gakka/06bio/dobutsu/index.html
メールアドレス
Last Updated :2017/09/18

コミュニケーション情報 byコメンテータガイド

コメント

    クローン動物、体細胞初期化(リプログラミング)、iPS細胞。

学歴・経歴

学歴

  •  - 1999年, 近畿大学, 農学研究科, 畜産学

経歴

  •   1999年,  - 2007年,  近畿大学農学部 助手
  •   2008年, - 近畿大学農学部 講師

研究活動情報

研究分野

  • 畜産学・獣医学, 応用動物科学
  • 動物生命科学, 統合動物科学
  • 実験動物学, 実験動物学

研究キーワード

  • 核移植, 未受精卵子, 初期化, iPS細胞, 細胞周期, 体細胞クローン, 核リプログラミング, 転写活性化領域, 卵子, クローン, 発生生物学

論文

  • Immortalized prairie vole-derived fibroblasts (VMF-K4DTs) can be transformed into pluripotent stem cells and provide a useful tool with which to determine optimal reprogramming conditions., Katayama M, Hirayama T, Kiyono T, Onuma M, Tani T, Takeda S, Nishimori K, Fukuda T, The Journal of reproduction and development, 63, 3, 311, 318,   2017年06月, 査読有り
  • Mitogen-Activated Protein Kinase Activity Is Not Essential for the First Step of Nuclear Reprogramming in Bovine Somatic Cell Nuclear Transfer., Tani T, Kato Y, Cellular reprogramming, 19, 2, 95, 106,   2017年04月, 査読有り
    概要:For reprogramming a somatic nucleus during mammalian cloning, metaphase of the second meiotic division (MII) oocytes has been widely used as recipient cytoplasm. High activity of maturation-promoting factor (MPF) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) is believed to accelerate the remodeling and/or reprogramming of a somatic nucleus introduced into the ooplasm by somatic cell nuclear transfer. We demonstrated previously that the first step in nuclear reprogramming is not directly regulated by MPF and MAPK because activated oocytes in which MPF activity is diminished and MAPK activity is maintained can develop to the blastocyst stage after receiving an M phase somatic nucleus in bovine cloning. In this study, our aim was to test whether MAPK activity is necessary for the first step in nuclear reprogramming and/or chromatin remodeling (phosphorylation of histone H3 at Ser3, trimethylation of histone H3 at Lys 9, and acetylation of histone H3 at Lys14) in bovine somatic cloning. We found that it was not necessary, and neither was MPF activity
  • Chick derived induced pluripotent stem cells by the poly-cistronic transposon with enhanced transcriptional activity., Katayama M, Hirayama T, Tani T, Nishimori K, Onuma M, Fukuda T, Journal of cellular physiology,   2017年04月, 査読有り
  • Expression of Six Proteins Causes Reprogramming of Porcine Fibroblasts Into Induced Pluripotent Stem Cells With Both Active X Chromosomes., Fukuda T, Tani T, Haraguchi S, Donai K, Nakajima N, Uenishi H, Eitsuka T, Miyagawa M, Song S, Onuma M, Hoshino Y, Sato E, Honda A, Journal of cellular biochemistry, 118, 3, 537, 553,   2017年03月, 査読有り
  • Cover Image, Volume 118, Number 3, March 2017., Fukuda T, Tani T, Haraguchi S, Donai K, Nakajima N, Uenishi H, Eitsuka T, Miyagawa M, Song S, Onuma M, Hoshino Y, Sato E, Honda A, Journal of cellular biochemistry, 118, 3, i,   2017年03月
  • Developmental Competence of Vitrified-Warmed Bovine Oocytes at the Germinal-Vesicle Stage is Improved by Cyclic Adenosine Monophosphate Modulators during In Vitro Maturation., Ezoe K, Yabuuchi A, Tani T, Mori C, Miki T, Takayama Y, Beyhan Z, Kato Y, Okuno T, Kobayashi T, Kato K, PloS one, 10, 5, e0126801,   2015年, 査読有り
  • Radical Acceleration of Nuclear Reprogramming by Chromatin Remodeling with the Transactivation Domain of MyoD, Hirai H, Tani T, Katoku-Kikyo N, Kellner S, Karian P, Firpo M, Kikyo N., Stem Cells, Sep;29, 9, 1349, 61,   2011年09月, 査読有り
    概要:Induced pluripotent stem cells (iPSCs) can be created by reprogramming differentiated cells through introduction of defined genes, most commonly Oct4, Sox2, Klf4, and c-Myc (OSKM). However, this process is slow and extremely inefficient. Here, we demonstrate radical acceleration of iPSC creation with a fusion gene between Oct4 and the powerful transactivation domain (TAD) of MyoD (M 3O). Transduction of M 3O as well as Sox2, Klf4, and c-Myc into fibroblasts effectively remodeled patterns of DNA methylation, chromatin accessibility, histone modifications, and protein binding at pluripotency genes, raising the efficiency of making mouse and human iPSCs more than 50-fold in comparison to OSKM. These results identified that one of the most critical barriers to iPSC creation is poor chromatin accessibility and protein recruitment to pluripotency genes. The MyoD TAD has a capability of over-coming this problem. Our approach of fusing TADs to unrelated transcription factors has far-reaching implications as a powerful tool for transcriptional reprogramming beyond application to iPSC technology. © AlphaMed Press.
  • Structure and functions of powerful transactivators: VP16, MyoD and FoxA, Hiroyuki Hirai, Tetsuya Tani, Nobuaki Kikyo, International Journal of Developmental Biology, 54, 1589, 1596,   2011年08月15日
    概要:Induced pluripotent stem cell (iPSC) technology is a promising approach for converting one type of a differentiated cell into another type of differentiated cell through a pluripotent state as an intermediate step. Recent studies, however, indicate the possibility of directly converting one cell type to another without going through a pluripotent state. This direct reprogramming approach is dependent on a combination of highly potent transcription factorsfor cell-type conversion, presumably skipping more physiological and multi-step differentiation processes. A trial-and-error strategy is commonly used to screen many candidate transcription factors to identify the correct combination of factors. We speculate, however, that a better understanding of the functional mechanisms of exemplary transcriptional activators will facilitate the identification of novel factor combinations capable of direct reprogramming. The purpose of this review is to critically examine the literature on three highly potent transcriptional activators: the herpes virus protein, VP16; the master regulator of skeletal muscle differentiation, MyoD and the "pioneer" factor for hepatogenesis, FoxA. We discuss the roles of their functional protein domains, interacting partners and chromatin remodeling mechanisms during gene activation to understand how these factors open the chromatin of inactive genes and reset the transcriptional pattern during cell type conversion. © 2010 UBC Press.
  • Bovine oocytes with the potential to reprogram somatic cell nuclei have a unique 23-kDa protein, phosphorylated transcriptionally controlled tumor protein (TCTP), Tani T, Shimada H, Kato Y, Tsunoda Y, Cloning Stem Cells, 9, 9, 267, 280,   2007年07月10日
    概要:Despite the long-held assumption that reprogramming factors are present in mammalian oocytes at the second metaphase stage, the molecular nature of these factors is not known. Here, we demonstrated that oocytes with the potential to reprogram somatic cell nuclei have a unique 23-kDa protein, phosphorylated transcriptionally controlled tumor protein (TCTP). Injection of TCTP double-stranded RNA into germinal vesicle oocytes decreased the potential of nuclear-transferred (NT) oocytes, but not in vitro fertilized oocytes, to develop into blastocysts. Phosphorylated TCTP is considered to facilitate the first step of somatic cell reprogramming. After transfer of blastocysts that developed from NT oocytes fused with cumulus cells in which phosphorylated TCTP peptide was previously incorporated, the recipient pregnancy rate (47%) increased and the abortion rate (13%) decreased. Moreover, all seven cloned calves survived for at least 1 month after parturition, and had no morphologic abnormalities. The present study demonstrated that pretreatment of donor cells with phosphorylated TCTP peptide has a beneficial effect on the potential of bovine somatic cell nuclei to develop into normal cloned calves. Before widespread application of TCTP for bovine cloning, however, a large-scale embryo transfer study using different donor cell lines of various origins is necessary. © Mary Ann Liebert, Inc.
  • Aberrant spindle assembly checkpoint in bovine somatic cell nuclear transfer, Tani T, Kato Y, Tsunoda Y, Frontires in Bioscience, 12, 1, 2693, 2705,   2007年01月, 査読有り
  • Demecolcine-assisted enucleation for bovine cloning, Tani T, Shimada H, Kato Y, Tsunoda Y, Cloning Stem Cells, 8, 8, 61, 66,   2006年04月21日
    概要:The present study demonstrated that demecolcine treatment for at least 30 min produces a membrane protrusion in metaphase II-stage bovine oocytes. The maternal chromosome mass is condensed within the protrusion, which makes it easy to remove the maternal chromosomes for nuclear transfer (NT). Maturation promoting factor activity, but not mitogen-activated protein kinase activity, increased up to 30% in oocytes during demecolcine treatment. One normal healthy calf was obtained after transfer of four NT blastocysts produced following demecolcine treatment. Demecolcine treatment did not increase the potential of NT oocytes to develop into blastocysts. The present study demonstrated that chemically-assisted removal of chromosomes is effective for bovine cloning. © Mary Ann Liebert, Inc.
  • Effect of low-temperature bovine ovary storage on the maturation rate and developmental potential of follicular oocytes after in vitro fertilization, parthenogenetic activation, or somatic cell nucleus transfer, S. Matsushita, T. Tani, Y. Kato, Y. Tsunoda, Animal Reproduction Science, 84, 293, 301,   2004年09月01日
    概要:The present study examined the competence of oocytes from bovine ovaries stored at low temperatures for at least 1 day, which is the necessary time period to complete inspection for bovine spongiform encephalopathy. Storage of ovaries at 10°C for 24h did not affect oocyte maturation (68% versus 68%) or the potential of oocytes to develop into day 8 blastocysts after in vitro fertilization (25% versus 27%), parthenogenetic activation (19% versus 25%), or somatic cell nucleus transfer (27% versus 32%) compared with controls. In vitro-fertilized and parthenogenetic oocytes from ovaries stored at 10°C for 48h had a significantly decreased maturation rate and developmental potential, but nucleus-transferred oocytes that received cultured cumulus cells did not (27% versus 32%). Thus, bovine ovaries can be stored at 10°C for at least 24h without decreasing oocyte maturation competence or the developmental potential of in vitro-fertilized, parthenogenetically activated, and somatic cell nucleus-transferred oocytes, at least to the blastocyst stage. The present study provides valuable information with regard to removing bovine ovaries from abattoirs after testing for bovine spongiform encephalopathy. © 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Nuclear transfer of adult bone marrow mesenchymal stem cells: developmental totipotency of tissue-specific stem cells from an adult mammal., Kato Y, Imabayashi H, Mori T, Tani T, Taniguchi M, Higashi M, Matsumoto M, Umezawa A, Tsunoda Y, Biology of reproduction, 70, 2, 415, 418,   2004年02月, 査読有り
  • Reprogramming of Bovine Somatic Cell Nuclei Is Not Directly Regulated by Maturation Promoting Factor or Mitogen-Activated Protein Kinase Activity , Tetsuya Tani, Yoko Kato, Yukio Tsunoda, Yukio Tsunoda, Biology of reproduction, 69: 1890 - 1894, 1890, 1894,   2003年12月01日
    概要:Cloned mammals with normal fertility have been produced by nuclear transfer. Thus, oocyte cytoplasm has the ability to convert differentiated somatic cell nuclei into a state that resembles the conditions that occur at fertilization (nuclear reprogramming). Despite the long-held assumption that reprogramming factors are present in mammalian oocytes, the molecular nature of these factors is not known. The present study demonstrates that the process of nuclear reprogramming is not directly regulated by maturation promoting factor or mitogenactivated protein kinase activity. The potential for nuclear-transferred oocytes to develop to the blastocyst stage was not different when somatic cells at the M phase were fused with oocytes activated with ionomycin and cycloheximide 1-5 h before (12%-22%) but was significantly decreased when oocytes were activated 6 h before (1%). Further molecular studies on the differences between oocytes with and without reprogramming potential are required and will be useful for the identification of reprogramming factors.
  • Effect of oxygen tension on the developmental potential of parthenogenetic oocytes and nuclear-transferred porcine oocytes receiving fetal fibroblast cells, Masahiro Kawakami, Tetsuya Tani, Xi Jun Yin, Yoko Kato, Yukio Tsunoda, Journal of Reproduction and Development, 48, 409, 414,   2002年12月, 査読有り
    概要:The effects of oxygen tension (5% and 20%) during in vitro culture of oocytes and fetal fibroblast cells on the developmental potential of parthenogenetic and nuclear-transferred porcine oocytes were examined. The potential of parthenogenetic oocytes matured and cultured under different oxygen tensions to develop into blastocysts was not significantly different (5 to 16%). The proportions of enucleated oocytes receiving fetal fibroblast cells that developed into blastocysts were significantly lower when somatic cells were cultured under low oxygen tension (2 and 3%) than under high oxygen tension (7%). The effects of oxygen tension during culture of oocytes and somatic cells on the developmental potential of parthenogenetic and nuclear-transferred oocytes is discussed.
  • Production of cloned pigs from adult somatic cells by chemically assisted removal of maternal chromosomes, Yin XJ*, Tani T*, Yonemura I, Kawakami M, Miyamoto K, Hasegawa R, Kato Y, Tsunoda Y (*equal contribution), Biology of Reproduction, 67, 67, 442, 446,   2002年01月, 査読有り
    概要:The present study demonstrated that brief treatment of in vitro-matured porcine oocytes with demecolcine results in a membrane protrusion that contains a condensed chromosome mass, which can be easily removed by aspiration. This simple, chemically assisted method for removing maternal chromosomes enabled the production of a large number of nuclear-transferred porcine eggs. The development of eggs whose chromosomes were removed by this procedure following transfer of somatic cell nuclei to the blastocyst stage was not significantly different among groups activated using different procedures (6% to 11%) and was also not different among donor cells of different origins (3% to 9%), except for cumulus cells (0.4%). After transfer of 180 to 341 nuclear-transferred eggs that received somatic cells to 6 recipients, 2 of the recipients produced 8 healthy cloned piglets from the heart cells of a female pig. The chemically assisted method for removing maternal chromosomes was also effective for bovine and rabbit eggs.
  • Nuclear transfer of mouse follicular epithelial cells pretreated with spermine, protamine, or putrescine, Yabuuchi A, Tani T, Kato Y, Tsunoda Y, Journal of Experimental Zoology, 289, 3, 208, 212,   2001年02月, 査読有り
    概要:The in vitro and in vivo developmental potential of nuclear transferred embryos receiving follicular epithelial cells pretreated with spermine (5 and 20 mM), protamine (0.25 and 25 mg/ml), or putrescine (1 and 100 microg/ml) at room and reduced temperatures was examined in the mouse. The pretreated donor cells were first fused with enucleated oocytes, and then nuclei from reconstituted eggs at the two-cell stage were fused with the enucleated fertilized two-cell embryos. The proportion of reconstituted embryos that developed into blastocysts was not significantly different among groups. After transfer to recipients, implantation rates were not different between groups and fetuses were obtained in protamine- and spermine-treated groups as well as in control groups. These results demonstrate that pretreatment of nuclear donor cells with spermine, protamine, or putrescine does not enhance the developmental potential in vitro or in vivo in the mouse
  • Mouse cloned from embryonic stem (ES) cells synchronized in metaphase with nocodazole., Tomokazu Amano, Tetsuya Tani, Yoko Kato, Yukio Tsunoda, Yukio Tsunoda, Journal of Experimental Zoology, 289, 109, 118,   2001年02月, 査読有り
  • Direct exposure of chromosomes to nonactivated ovum cytoplasm is effective for bovine somatic cell nucleus reprogramming, Tani T, Kato Y, Tsunoda Y, Biology of Reproduction, 64, 64, 324, 330,   2001年01月, 査読有り
    概要:We examined the in vitro developmental potential of non-activated and activated enucleated ova receiving cumulus cells at various stages of the cell cycle. Eleven to 29% of activated ova receiving donor cells stopped developing at the 8-cell stage but 21% to 50% of nonactivated ova receiving donor cells at either the G0, G1, G2, or M phase, or cycling cells developed into blastocysts. One normal calf was born after transferring five blastocysts that had developed from ova receiving donor cells at the M phase. The present study demonstrated that direct exposure of donor chromosomes to nonactivated ovum cytoplasm is effective for somatic cell nucleus reprogramming, and activated ovum cytoplasm does not reprogram the nucleus.
  • Development of rabbit parthenogenetic oocytes and nuclear-transferred oocytes receiving cultured cumulus cells, X. J. Yin, T. Tani, Y. Kato, Y. Tsunoda, Theriogenology, 54, 1469, 1476,   2000年12月, 査読有り
    概要:The present study determined a suitable parthenogenetic activation procedure for rabbit oocytes and examined the developmental potential of enucleated oocytes receiving cultured cumulus cells. Unfertilized oocytes recovered from superovulated rabbits were activated with one or two sets of electrical pulses, with or without subsequent administration of 6-dimethylaminopurine (6-DMAP). The proportion of oocytes treated with one or two sets of electrical pulses and 6-DMAP that cleaved (87% and 98%, respectively) and developed into blastocysts (77% and 85%, respectively) was significantly higher (P < 0.05) than those activated with electrical pulses alone (30% and 42% for cleavage, 7% and 17% for blastocysts). Cumulus cells separated from ovulated oocytes obtained from mature rabbits were cultured for three to five passages and then induced to quiescence by serum starvation before nuclear transfer. The enucleated oocytes receiving cumulus cells were activated with electrical pulses followed by the addition of 6-DMAP, and cultured in vitro for 5 to 6 d or transferred to pseudopregnant recipient females 1 d after activation. Of 186 nuclear-transferred oocytes, 123 (66%) cleaved and 42 (23%) developed into blastocysts. After transfer of 174 nuclear-transferred oocytes to 8 recipient females, a total of 3 implantation sites were observed in 3 recipient females but no fetuses were obtained. © 2000 by Elsevier Science Inc.
  • Efficient cryopreservation of bovine blastocysts derived from nuclear transfer with somatic cells using partial dehydration and vitrification, B. X. Nguyen, B. X. Nguyen, Y. Sotomaru, T. Tani, Y. Kato, Y. Tsunoda, Theriogenology, 53, 1439, 1448,   2000年04月, 査読有り
    概要:Preservation by vitrification of Day 7 and Day 8 bovine blastocysts derived from nuclear transfer with cumulus cells was compared with preservation of in vitro fertilized blastocysts. In Experiment 1, embryos were vitrified in PBS containing 60% ethylene glycol. In Experiment 2, they were vitrified in combination with partial dehydration using a solution of 39% ethylene glycol + 0.7 M sucrose and 8.6% Ficoll. In Experiment I, survival and hatching rates were 44 and 95% for nuclear transferred embryos, and 78 and 55% for in vitro fertilized embryos, respectively. In Experiment 2, survival and hatching rates were 93 and 95% for nuclear transfer embryos, and 77 and 85% for in vitro fertilized embryos, respectively. It is concluded that Day 7 and Day 8 bovine blastocysts derived from cumulus cells could be cryopreserved without the loss of viability by a simple and efficient method using a combination of partial dehydration and vitrification. (C) 2000 by Elsevier Science Inc.
  • Production of mice derived entirely from embryonic stem cells after injecting the cells into heat treated blastocysts, T. Amano, K. Nakamura, T. Tani, Y. Kato, Y. Tsunoda, Theriogenology, 53, 1449, 1458,   2000年04月, 査読有り
    概要:The sensitivity of the inner cell mass (ICM) and trophectoderm (TE) of mouse blastocysts to high temperatures was examined. When blastocysts with a diameter of 100 to 120 μm treated for 15 to 20 min at 45°C were cultured in vitro, the cell number in the ICM did not increase, although that in the TE did increase. After transfer of treated blastocysts to recipients, implantation was not drastically inhibited but no live fetuses were obtained. These results demonstrated that the ICM at the blastocyst stage was more sensitive to high temperature than the TE. ICM clumps or ES cells were injected into blastocysts treated for 20 min at 45°C. After transfer of injected blastocysts to recipients, we obtained mice derived completely from ICM or ES cells as judged by GPI analysis. Since 4 of 7 ES-cell derived mice, but none of the 6 mice derived from the ICM died after birth, an as yet unidentified epigenetic alteration might have occurred during the establishment and/or culture of ES cells.
  • Developmental potential of cumulus cell-derived culture frozen in a quiescent state after nucleus transfer, T. Tani, Y. Kato, Y. Tsunoda, Theriogenology, 53, 8, 1623, 1629,   2000年05月, 査読有り
    概要:An efficient method for freezing donor cells is necessary when using nucleus transfer of somatic cells for large-scale cloning. In the present study, we developed a method for freezing and thawing bovine cumulus cell-derived cultured cells to be used as nucleus donors. Cumulus cells were obtained from ovaries of living and slaughtered bovine and cultured in vitro. Cumulus cell-derived cultured cells were serum-starved for several days to induce a quiescent state and then frozen at −70 °C for at least 2 d. Immediately thereafter or 2 h after thawing, the cells were used as donor cells for nuclear transfer without additional in vitro culture. The fusion rate with recipient cytoplasts was not affected by the cumulus cell source (slaughtered or living) or time after thawing (0 and 2 h). The cleavage rate of frozen-thawed cumulus cell-derived cultured cells from slaughtered cows immediately after thawing (0 h) was highest (97%) and was significantly higher than that of controls (85%) or cells transferred 2 h after thawing (85%). There were no significant differences among any of the groups in the potential of the nuclear transfer embryos to develop into blastocysts (34 vs 44 and 44%, 39 vs 45 and 46%). Thus, storage of bovine cumulus cell-derived cultured cells in the quiescent state at −70 °C is effective and might be useful and convenient for large-scale cloning. The maximum storage periods and developmental potential of embryos after such nucleus transfers requires further examination.
  • Eight calves cloned from somatic cells of a single adult, Kato Y, Tani T, Sotomaru Y, Kurokawa K, Kato J, Doguchi H, Yasue H, Tsunoda Y, Science, 282, 282, 2095, 2098,   1998年12月, 査読有り
    概要:Eight calves were derived from differentiated cells of a single adult cow, five from cumulus cells and three from oviductal cells out of 10 embryos transferred to surrogate cows (80 percent success). All calves were visibly normal, but four died at or soon after birth from environmental abuses, and postmortem analysis revealed no abnormality. These results show that bovine cumulus and oviductal epithelial cells of the adult have the genetic content to direct the development of newborn calves.

MISC

  • Pre-fusion treatment with phytohaemaglutinin-P (PHA-P) increases relative expression of mitochondria related genes in somatic cell nuclear transfer embryos in pig, Ndubuisi Samuel MACHEBE, Masaki HATA, Kohei ARIFUKU, Yurika NARUMIYA,Yuki ITANI, Kazuki OHATA, Tetsuya TANI and Yoko KATO, The 17th Asian-Australasian Association of Animal Production Societie,   2016年08月
  • Evaluation of the impact of pre-exposure to PHA on developmental efficiency of porcine PA and SCNT embryos, Ndubuisi Samuel MACHEBE, Masaki HATA, Kohei ARIFUKU, Yurika NARUMIYA,Yuki ITANI, Kazuki OH, 日本畜産学会第121回大会,   2016年03月
  • Development of porcine cloned embryos produced using fibroblast and porcine induced pluripotent stem cells as nuclei donor cell types, Ndubuisi Samuel MACHEBE, Masaki HATA, Kohei ARIFUKU, Yurika NARUMIYA,Yuki ITANI, Kazuki OHATA, Tomokazu FUKUDA, Tetsuya TANI and Yoko KATO, International Symposium on the Future of Nuclear Transfer and Nucleara Reprogramming,   2016年03月
  • マウス個体の老化が生殖能力に及ぼす影響ならびに個体老化の緩和に関する予備的検討, 山口正義, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 61, Suppl Japanese Issue, J156,   2015年09月05日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201502202412357150
  • リプログラミング6因子の発現によるブタiPS細胞の作製と特徴, 福田智一, 谷哲弥, 原口清輝, 土内憲一郎, 中嶋信美, 上西博英, 永塚貴弘, 宮川誠, 宋相憲, 大沼学, 星野由美, 佐藤英明, 本多新, 日本実験動物学会総会講演要旨集, 64th, 227,   2017年04月28日, http://jglobal.jst.go.jp/public/201702231444705311
  • ブタ精子の前処理がICSI卵の体外発生能に及ぼす影響, 秦仁樹, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 61, Suppl Japanese Issue, J135,   2015年09月05日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201502210915225670
  • アメリカ平原ハタネズミ由来の人工多能性幹細胞の作成, 片山雅史, 平山貴士, 堀江健吾, 清野透, 土内憲一郎, 谷哲弥, 竹田省, 西森克彦, 福田智一, Journal of Reproduction and Development, 62, Suppl Japanese Issue, j79,   2016年09月, http://jglobal.jst.go.jp/public/201702240496456493
  • Oct3/4,Nanog遺伝子の発現を指標としたマウス体細胞核移植胚の移植前選別の試み, 大畠一輝, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 61, Suppl Japanese Issue, J150,   2015年09月05日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201502215546258277
  • マウス体細胞核移植胚の発生能と胚盤胞期におけるNanogの発現様式との関連性, 大畠一輝, 谷哲弥, 加藤容子, J Mamm Ova Res, 32, 2, S27,   2015年04月01日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201502220995213168
  • マウス体細胞核移植卵の第一卵割における不等分裂改善の試み, 大畠一輝, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 60, Suppl Japanese Issue, J142,   2014年08月10日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402201305623307
  • ブタ由来人工多能性幹細胞の生物学的特性の解析, 福田智一, 谷哲弥, 原口清輝, 土内憲一郎, 星野由美, 西森克彦, J Reprod Dev, 60, Suppl Japanese Issue, J67,   2014年08月10日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402280881209254
  • 体外加齢ブタ未受精卵の生物学的特性と体外発生能の検討, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 60, Suppl Japanese Issue, J78,   2014年08月10日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402267672538244
  • 融解後のMG132処理がウシ凍結‐融解未受精卵の体外発生能に及ぼす影響, 清水聡一郎, 谷哲弥, 加藤容子, J Mamm Ova Res, 31, 2, S44,   2014年04月01日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402203677557966
  • マウス体細胞核移植胚の2細胞期における割球サイズの差異が発生能に及ぼす影響, 大畠一輝, 谷哲弥, 加藤容子, J Mamm Ova Res, 31, 2, S54,   2014年04月01日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402297508578320
  • 過剰排卵処置の有無がマウス体細胞核移植卵の発生能に及ぼす影響, 松下淳, 谷哲弥, 加藤容子, 日本畜産学会大会講演要旨, 118th, 202,   2014年03月27日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201402246465545284
  • ブタ未受精卵の体外加齢抑制法の最適化, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 59, Suppl Japanese Issue, J76,   2013年08月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201302246632829268
  • 核リプログラミング因子強発現卵による核リプログラミング能増強の試み, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, J Reprod Dev, 58, Suppl Japanese Issue, J109,   2012年08月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=201202217759658902
    概要:【目的】未受精卵をレシピエント卵細胞として作製された体細胞クローン胚は、卵細胞質内で起こる核リプログラミングが不完全ため個体への発生能が低く、その原因の一つとして未受精卵子に含まれている核リプログラミング因子の量的問題が推測されるが不明な点が多い。またES細胞と体細胞の融合法では、ES細胞に予めNANOGを強発現することでその効率が向上することやiPS細胞の誘導においてもそれぞれの核リプログラミング因子の量的バランスが重要であることが報告されている。そこで本研究では、予め既知の核リプログラミング因子をブタ未受精卵に人為的に強発現させ、その能力が増強させられるかブタ体細胞核移植卵の体外発生能により検討した。【方法】屠畜場由来体外成熟培養ブタ卵子は染色体を除去後、OCT4、SOX2、KLF4、C-MYC、NANOG、GADD45A、TCTPなどの核リプログラミング関連因子のRNA(0.1-10ug/ug)を卵細胞質へ注入したものをレシピエント卵細胞とした。ブタ胎児繊維芽細胞をドナー細胞とし電気融合法により核移植卵を作製後、ヒストンメチル化抗体を用いた免疫染色、8日間培養後の胚盤胞への体外発生率によりその影響を調べた。【結果】各遺伝子のRNAは、注入後3時間でそのタンパク質の発現が確認された。核移植後の核の変化は、強発現卵を用いた場合でも対照区と同様に高メチル化状態であった。高濃度のRNAを注入した強制発現卵由来の核移植卵の発生能は、遺伝子の種類に関わらず4細胞期で停止した。低濃度のRNAを注入した強発現卵の場合でも、対照区としてGFPを注入した場合と比較して発生率を向上させることはできなかった。これらの結果より、核リプログラミング因子を予め強発現した未受精卵をレシピエント卵細胞として体細胞核移植に用いても、その能力を増強させることはできず、エピジェネティックな変化も起こさないことから卵細胞質内で起こる不完全な核リプログラミングは既知の核リプログラミング因子の量的問題ではないことが明らかとなった。
  • ブタ未受精卵の体外加齢抑制法の最適化, 谷 哲弥, 加藤 容子, 日本繁殖生物学会 講演要旨集, 106, 0, OR1, 31-OR1-31,   2013年, http://ci.nii.ac.jp/naid/130005051044
    概要:【目的】排卵された未受精卵は,第二減数分裂中期で細胞周期を停止しており数時間以内に受精することで発生を開始する。体外受精や体細胞クローンなどの発生工学研究において,排卵直後の状態の未受精卵を用いることが一般的であり,体外及び体内での未受精卵の加齢は,卵細胞質の機能変化やその後の胚発生を大きく阻害することが知られている。特にブタ体細胞クローン研究では,胚移植に多数のクローン胚を準備する必要があるが一回の実験で操作できる未受精卵数は限られてくる。我々は,体外成熟したブタ未受精卵の単為発生及びクローン胚の体外発生率を落とすことなく24時間保存できることを報告した(第105回大会)。本研究では,このブタ未受精卵の体外加齢の抑制法の最適化をはかり,さらに卵細胞質の機能特性を明らかにすることを目的として実施した。【方法】成熟ブタ未受精卵は屠畜由来卵巣より採取し,44時間体外成熟したものを用いた。未受精卵の保存法の最適化は,培地(NCSU37,TCM199,PZM5,KSOM)・気相・温度・添加物(PVP,血清アルブミン,血清,ブタ卵胞液,ビタミンB,ビタミンC,メラトニン,メルカプトルエタノール,ピルビン酸,カフェイン,MG132)についてそれぞれ24時間後の保存後の単為発生の発生率と胚盤胞の細胞数を指標に検討した。また,至適条件で保存した未受精卵を用いて体細胞核移植も実施した。加齢未受精卵は,MPF,MAPK,クロマチンのアセチル化などの特性も調べた。【結果】保存に用いる培地の条件は,PZM5,5%酸素,39度,血清アルブミン及び血清添加で新鮮卵と同等の単為発生の発生率を示した。さらにピルビン酸及びメラトニンを添加することで,胚盤胞の細胞数の有意な増加も確認できたことから,ブタ未受精卵の体外加齢抑制法に有効であることが明らかになった。さらに至適条件で保存した加齢抑制卵を用いても体細胞核移植胚の体外発生能は新鮮卵と同等であった。また,加齢抑制卵のMPFとMAPK活性は有意に低下しなかったがクロマチンは高頻度にアセチル化されていた。
  • Radical Acceleration of Nuclear Reprogramming by Chromatin Remodeling with the Transactivation Domain of MyoD, 谷 哲弥, 第34回日本分子生物学会年会,   2011年12月
  • MECHANISM OF NUCLEAR REPROGRAMMING DURING IPS CELL GENERATION, Kellner Steven, Hirai Hiroyuki, Tani Tetsuya, Katoku-Kikyo Nobuko, Firpo Meri, Kikyo Nobuaki, Internatinal Society for Stem Cell Reserch,   2010年06月
  • メラトニンがブタ単為発生卵ならびに体細胞核移植卵の体外発生能に及ぼす影響, 中野真夕, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, J Mamm Ova Res, 26, 2, S81,   2009年04月01日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902277532605737
  • ブタ体細胞核移植卵の体外発生能に及ぼすバブプロ酸の影響, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 110th, 83,   2009年03月27日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902218098657620
  • ウシ未受精卵からの初期化因子の同定と体細胞核移植への利用, 谷哲弥, 島田浩明, 加藤容子, 角田幸雄, J Reprod Dev, 53, Supplement, J126,   2007年09月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902293881275596
  • メラトニンがブタ単為発生卵ならびに体細胞核移植卵の体外発生能に及ぼす影響, 中野 真夕, 谷 哲弥, 加藤 容子, 角田 幸雄, Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌, 26, 2,   2009年04月01日, http://ci.nii.ac.jp/naid/10024965074
  • ウシ体細胞核移植卵の初期化におけるMAPKの必要性, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, J Reprod Dev, 52, Supplement, J118,   2006年08月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902237430893906
  • ウシ体細胞核移植卵のスピンドルチエックポイント, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 105th, 74,   2005年08月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902253783561198
  • 熊本県におけるクローン技術研究の概要, 谷口雅律, 中嶋達彦, 松本道夫, 田川博稔, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 熊本県農業研究センター畜産研究所試験成績書, 2002, 130, 132,   2003年11月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902221767285939
  • 褐毛和種体細胞クローン雄牛の受精能力, 谷口雅律, 佐藤敬明, 川辺久浩, 松本道夫, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 熊本県農業研究センター畜産研究所試験成績書, 2001, 120, 121,   2002年11月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902164566730477
  • ブタ核移植卵の体外発生能に及ぼすドナー細胞及び核移植卵の培養気相条件の影響, 川上雅弘, 谷哲弥, いんき俊, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 100th, 102,   2002年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902156455319937
  • 活性化条件とドナー細胞の種類が豚体細胞由来再構築卵の体外発生能に及ぼす影響, JUN Y X, 谷哲弥, 米村功, 川上雅弘, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 99th, 56,   2001年08月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902153704206871
  • ブタ単為発生卵ならびに胎子繊維芽細胞由来核移植卵の体外発生能に及ぼす酸素気相の影響, 川上 雅弘, 谷 哲弥, YIN Xi Jun, 加藤 容子, 角田 幸雄, The Journal of reproduction and development, 48, 4, 409, 414,   2002年08月01日, http://ci.nii.ac.jp/naid/10026617350
  • 体細胞クローン, 角田幸雄, 谷哲弥, 加藤容子, 日本畜産学会大会講演要旨, 98th, 21,   2001年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902148091078456
  • ウサギ体細胞の核移植 融合後の染色体の除去, YIN X J, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 98th, 106,   2001年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902151341000106
  • 輸送した卵子あるいは卵巣由来のレシピエント卵子がウシ卵丘細胞核移植卵の体外発生能に及ぼす影響, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, J Reprod Dev, 45, Supplement, A14,   2000年12月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902149214856188
  • 体細胞クローン動物, 角田幸雄, 谷哲弥, 加藤容子, J Reprod Dev, 45, Supplement, J61-J64,   2000年12月25日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902181804676020
  • マウス排卵卵丘細胞由来核移植卵の体外発生能の検討, 薮内晶子, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 97th, 118,   2000年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902125090645349
  • ウシ体細胞核移植におけるドナー細胞のスクリーニング, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 97th, 117,   2000年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902113808392683
  • ウサギ卵子の単為発生誘起と継代培養卵丘細胞の核移植, YIN X J, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 97th, 118,   2000年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902161555091155
  • 高温処理はい盤胞への注入によるES細胞由来マウスの作出, 天野朋和, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 96th, 85,   1999年09月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902104706399005
  • 高温処理はい盤胞への注入によるES細胞由来マウスの作出 特に4倍体はい盤胞との比較に関する検討, 天野朋和, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 97th, 119,   2000年03月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902187926043891
  • ウシ卵丘細胞由来核移植卵の発生能に及ぼすドナー細胞の凍結保存温度と保存期間の影響, 谷哲弥, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 96th, 84,   1999年09月20日, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902175510119467
  • 体細胞クローン動物 (1999年度日本繁殖生物学会シンポジウム講演論文 発生・分化とその制御), 角田 幸雄, 谷 哲弥, 加藤 容子, Journal of Reproduction and Development, 45, 0, j61, 64,   1999年12月, http://ci.nii.ac.jp/naid/40005343972
  • 雄ウシ由来体細胞をドナーとした核移植卵の発生能の検討, 外丸祐介, 谷哲弥, 加藤順也, 加藤容子, 角田幸雄, 日本繁殖生物学会講演要旨, 91st, 47,   1998年08月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902143365271760
  • 継代培養ウシ卵細胞の核移植,特にドナー細胞の細胞周期同調法の違いが核移植卵の発生能に及ぼす影響, 谷哲弥, 外丸祐介, 加藤順也, 加藤容子, 角田幸雄, 日本繁殖生物学会講演要旨, 91st, 47,   1998年08月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902167709968231
  • ウシ卵丘細胞由来核移植卵の発生能に及ぼすドナー細胞の凍結保存的影響, 谷 哲弥, 加藤 容子, 角田 幸雄, Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌, 16, 2,   1999年04月01日, http://ci.nii.ac.jp/naid/10012142552
  • ウシ卵管由来細胞の核移植,特にドナー細胞の低血清処理日数および継代回数の影響, 外丸祐介, 谷哲弥, 高橋清也, 今井裕, 加藤順也, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 94th, 176,   1998年03月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902175193829550
  • ウシ卵丘細胞の核移植に及ぼすドナー細胞の低血清処理日数と継代回数の影響, 谷哲弥, 外丸祐介, 高橋清也, 今井裕, 加藤順也, 加藤容子, 角田幸雄, 日本畜産学会大会講演要旨, 94th, 175,   1998年03月, http://jglobal.jst.go.jp/detail.php?from=API&JGLOBAL_ID=200902196074123540
  • ウシ卵丘細胞の核移植, 特にドナー細胞の低血清処理日数の影響, 谷 哲弥, 外丸 祐介, 加藤 順也, 加藤 容子, 角田 幸雄, Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌, 15, 2,   1998年04月01日, http://ci.nii.ac.jp/naid/10013835418

特許

  • 体細胞核初期化因子, 角田 幸雄, 加藤 容子, 谷 哲弥, 特願2002-329772, 特開2004-161682
  • 体細胞核初期化因子, 角田 幸雄, 加藤 容子, 谷 哲弥, 特願2002-329772, 特開2004-161682, 特許第3736517号
  • 化学的染色体除去法による核移植用レシピエント卵の調製方法およびそれを用いるクローン豚の作出方法, 角田 幸雄, 加藤 容子, 谷 哲弥, 特願2001-330815, 特開2003-125673
  • 体細胞より発生したウシ初期胚由来継代細胞株の樹立法, 角田 幸雄, 加藤 容子, 谷 哲弥, 特願2000-000080, 特開2001-186876
  • 細胞核移植方法およびそれを用いるクローン哺乳動物の生産方法, 角田 幸雄, 加藤 容子, 谷 哲弥, 特願2000-000082, 特開2001-186827

競争的資金

  • 文部科学省, 科学研究費補助金(基盤研究(C)), 核リモデリングに基づく体細胞初期化促進法と選別法の開発, 谷 哲弥
  • 科研費, 若手研究B, 転写活性化法による体細胞初期化促進法の開発 , 谷 哲弥
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(若手研究(B)), 転写活性化法による体細胞初期化促進法の開発, 谷 哲弥, iPS細胞による転写因子型初期化において、Oct4の標的領域への結合力が極めて重要であり、他の転写因子MyoD及びVP16の転写活性化領域をOct4に付加することでその結合を強め効率的にまた均一にiPS細胞へ初期化されることを見いだした。しかしながら体細胞核移植による卵細胞質型初期化は促進しなかった。
  • 科研費, 若手研究B, 核リプログラミング誘導因子を利用した新規体細胞核移植技術の開発 , 谷 哲弥
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(若手研究(B)), 核リプログラミング誘導因子を利用した新規体細胞核移植技術の開発, 谷 哲弥, 体細胞核移植における核リプログラミング能力を強化するために、iPS細胞の誘導に必要な核リプログラミング関連因子(Oct3/4,sox2,klf4,c-Myc,Nanog,Gadd45a)を強発現させたブタ未受精卵を作出してレシピエント卵細胞として用いたが、核移植卵の体外発生能を向上させることはできなかった。
  • 稲盛財団, 研究助成金, 未受精卵からの体細胞核初期化因子の同定と体細胞クローン技術への応用, 谷 哲弥
  • 住友財団, 基礎科学研究助成, 改変未受精卵を用いた体細胞核移植の初期化促進の試み, 谷 哲弥
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(若手研究(B)), ウシ体細胞核移植系を用いた体細胞核初期化機構の基礎研究, 谷 哲弥, 核移植技術を用いた体細胞クローン動物の作出は、未受精卵子の中に含まれると考えられる体細胞核を初期化することができる因子の存在を明らかにした。また、細胞周期制御の観点から核移植卵の正常性を検討した結果、MII期卵が紡錘体阻害剤により活性化されるスピンドルチェックポイントを核移植卵で調べると、未受精卵子の場合と異なり活性化しないことが明らかとなった。体細胞核の初期化を誘導する可能性のある因子をウシ未受精卵子のプロテオームにより同定した。そのタンパクは、リン酸化されたTCTP(transcriptionally controlled tumor protein)であり、体細胞核移植卵の胚盤胞期への発生率と相関があることから、体細胞核の初期化機構との相関を詳細に調べた。ウシ未成熟卵子に合成RNAおよびdsRNAインジェクションして強制発現させた卵は、MI期で細胞周期を停止させたが、dsRNAにより発現を阻害した卵子は通常にMII期まで達した。dsRNAによりTCTPの発現を阻害した卵を用いて体外受精・体細胞核移植により発生能を調べると体細胞核移植卵のみ発生能は低下した。さらに、予めドナー細胞である体細胞にリン酸化部位を含むTCTPのペプチドをHIV envelop法を用いて取り込ませた後、核移植卵を作成し体外及び体内発生率を検討した。その結果、体外発生能において差が見られなかったが体内発生能において発生率が向上した。すなわち17頭の受胚雌に移植した結果、8頭(47%)が受胎したが、うち1頭(13%)が妊娠51日目に流産した。その他の妊娠雌は、いずれも自然分娩で正常な子ウシを分娩した。ペプチドを導入しない同じ体細胞を用いた場合の核移植卵の体内発生能は、受胎率は31%(4/13)、流産率は50%(2/4)、分娩後1ヶ月目の子ウシの生存率は0%(0/2)であった。このことからリン酸化TCTPペプチドを導入した体細胞を用いることによって正常な体細胞クローンウシの作出率が向上した。
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(基盤研究(A)), 核移植技術を用いたマウスES細胞由来個体の開発, 角田 幸雄, 胚性幹細胞(ES細胞)とは、1個の胚盤胞内細胞塊に由来する継代培養可能な細胞であり、他の胚と集合したり注入したのち受胚雌に移植するとキメラ個体が得られることから、遺伝子組換えを行ったES細胞から作出したキメラを正常なマウスと交配することによって多数のモデルマウスが作出されている。1999年に、ES細胞を除核未受精卵へ移植することによって生殖能力を持つマウス個体が得られる場合のあることが明らかとなった。しかしながら、産子への発生率は極めて低く、また得られた産子の多くは分娩直後に死亡することが明らかになっている。遺伝子組換えを行ったES細胞から正常な胎子や生殖能力のあるマウスを高率に得る技術が樹立できると、現在のキメラを介する方法にとってかわることとなり、実験動物学や基礎医学分野の研究への波及効果はきわめて大きい。そこで本研究では、高率にES細胞由来の産子を得ることを最終的な目的として、核移植卵の発生能に及ぼす諸条件を検討した。その結果、次の成果を得た。検討した項目は、核移植卵の集合による細胞数の増加、ES細胞の遺伝的背景、細胞周期、核移植方法、融合方法、活性化刺激方法、核移植卵の発生速度の影響である。本研究によって、マウスES細胞の核移植によって確実にクローンマウスを得ることができるようになった。しかしながら、核移植卵の体外における発生率は40〜80%と高いが、産子への発生率は1〜5%と低く、産子生産率を向上させるための検討がさらに必要と考えられた。
  • 科研費, 奨励研究A, ウシ体細胞核移植に及ぼす細胞周期の影響 , 谷 哲弥
  • 科研費, 若手研究B, ウシ体細胞核移植系を用いた体細胞核初期化機構の基礎研究
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(基盤研究(A)), 培養細胞を用いたクローン豚作出技術の開発, 角田 幸雄, 1997年に、成雌羊乳腺培養細胞を未受精卵に核移植することによって1頭の子羊が作出されて以来、体細胞クローン作出技術を家畜の育種・改良へ応用するための研究が行われてきた。その結果、成雌牛あるいは雄牛の体細胞の核移植によって確実に子牛を生産できるようになった。一方で、流産、死産、産直死等の異常が頻発することも明らかとなった。これに対して、体細胞クローン豚では牛でみられたような異常は認められていないが、成功率がきわめて低く、また成功例も乏しい。核移植の成功率を左右する要因として、ドナー核の単離と細胞周期の同調、レシピエント卵染色体の除去、ドナー核の導入、活性化刺激や体外培養などの諸条件があげられる。核を受け入れるレシピエント卵として、染色体を除去した第2減数分裂中期の未受精卵が用いられている。染色体の除去は第1極体の位置を指標としてその近辺の卵細胞質を多量に除去したり、ヘキストで染色後、蛍光顕微鏡下で観察しながら除去されている。いずれの手法を用いた場合でも、除去に時間がかかったり、除去の成功率が低かったり、卵細胞質の生存性が低下したりするなどの欠点がある。そこで本研究では、マウス胚性幹細胞を用いて核移植に必要な要素技術を確立しながら、染色体を容易に再現性高く除去する手法を確立することに重点をおいて実施した。その結果、牛、豚、ウサギ未受精卵を低濃度のシュークロースとデメコルシンを含む培地で短時間培養すると、凝集した染色体を含む細胞質小突起が囲卵腔に放出され、この小突起を除去することによって染色体の除去が容易に実施できることが明らかとなった。また、この方法で染色体を除去した卵細胞質へ体細胞を核移植することによって、正常なクローン豚が得られることを明らかにした。
  • 文部科学省, 科学研究費補助金(奨励研究(A)), ウシ体細胞核移植に及ぼす細胞周期の影響, 谷 哲弥, 哺乳動物の卵子を用いた核移植の実験において、ドナー細胞とレシピエント未受精卵細胞質の細胞周期の同調が極めて重要とされている。また、体細胞核を用いた核移植において、G0期のドナー細胞をM期の除核したレシピエント卵細胞質に同調及び融合することでクローン個体を作出する事ができる。そこで、各細胞周期(G0,G1,S、M及びG2期)に同調された細胞をドナーとして用いて核移植を行った。すなわち卵細胞質は、第二減数分裂中期の卵細胞質(M期)とその卵細胞質に活性化刺激を与えた活性化卵子(S期)をレシピエント卵細胞質としてそれぞれドナー細胞を融合し体外発生能を検討した。核移植卵の体外発生成績は、レシピエント卵細胞質に第二減数分裂中期の卵細胞質(M期)を用いた場合、ドナー細胞がS期以外のすべての組み合わせにおいて胚盤胞期までの発生が確認された。また、M期卵細胞質に活性化刺激を与えた活性化卵子(S期)を用いた場合、すべての組み合わせにおいて8細胞期以降への発生は阻害された。また、ドナー細胞及びレシピエント卵細胞質にM期を用いた組み合わせによって得られた核移植卵を受配雌に移植検査を行った結果、産子を得ることに成功した。これらのことにより、ウシ体細胞核移植においてドナー細胞にG0期を用いることが重要なのではなく、ドナー細胞とレシピエント卵細胞質の細胞周期の組み合わせが重要であることが明らかとなった。また、体細胞核移植には胚性細胞核を用いた核移植とは異なり、M期のレシピエント卵細胞質を用いることが重要であることから体細胞の初期化因子は胚性細胞核因子とは異なることが明らかとなった。